Пояснительная записка.

Хочешь быть умным – научись разумно

спрашивать, внимательно слушать,

спокойно отвечать и переставать

говорить, когда нечего больше сказать.

Франсуа де Ларошфуко

Непременным условием полноценной деятельности диагностических лабораторий является высокий уровень методики выполнения исследований.

Он, может быть, достигнут лишь при условии знания работниками лабораторий хода анализа и методик, с помощью которых эти исследования выполняются. Поскольку результаты анализа в значительной степени зависят от тщательного проведения подготовительных работ, необходимо выполнять основные указания по сбору материала, приготовлению питательных сред и т.п.

Для обнаружения микробов и вирусов исследуют выделения, жидкости и ткани организма, содержащие наибольшее количество возбудителей: кровь, спинномозговую жидкость, содержимое кожных высыпаний, носоглоточное отделяемое, испражнения, мочу и пр., а у погибших людей – кусочки органов. В каждом случае учитывают особенности предполагаемой инфекции, место максимальной (избирательной) локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Инфекционный материал от больных и умерших собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики. В таблице 1 приведены основные данные о характере инфекционного материала при разных инфекциях, сроках его взятия и средах для первичного посева (для бактериальных инфекций) или методах индикации (для вирусных инфекций). На практике выделения относительно неприхотливых возбудителей обычно проводят на средах приведенных в таблице 2, а прихотливых – в таблице 3.

Методов, используемых для индикации особенностей метаболизма бактерий, очень много, но на практике применяют значительно меньшее их количество. Многие из способов выявления тех или иных субстратов обуславливают применение дифференциально – диагностических сред, включающих различные индикаторы. Наиболее распространенные биохимические тесты предоставлены в таблице 4.

Для роста разных видов микробов требуется определенная реакция среды, которая выражается показателем концентрации водородных ионов (рН). При кислой реакции концентрация водородных (Н) ионов больше концентрации гидроксильных (ОН) ионов, при щёлочной реакции – наоборот, при нейтральной – количество тех и других равно. Для большинства бактерий рН среды устанавливают в пределах 6,8-8,0.

Индикаторы, меняющие свой цвет при изменении рН среды, используют не только для определения реакции среды. Их вводят также в состав специальных сред, которые служат для выявления биохимических свойств микробов. Изменение цвета среды указывает на образование кислоты или щёлочи при ферментативной деятельности микробов. Известны индикаторы, приобретающие ту или иную окраску лишь при щелочной или кислой реакции; вне этой реакции они бесцветны. Таковы, например, индикаторы, приведённые в таблице 5.

Более удобны двухцветные индикаторы, имеющие разную окраску в кислой и щелочной среде. Лакмусовая настойка, например, при кислой реакции приобретает розовую окраску, при щелочной – синюю. Часто применяют розоловую кислоту, которая в кислой среде до РН 6,2-6,5 – имеет желтую окраску, а, начиная от рН 6,5 приобретают бледно – розовый цвет, переходящий в интенсивно-розовый при щелочной реакции (начиная от рН 7,2).

Наиболее широко распространены индикаторы Кларка. Они имеют различную окраску в кислой и щелочной среде, а также хорошо выраженные переходные тона. Кроме того, диапазон чувствительности этих индикаторов весьма широк (таблица 6).

Белковой основой всех сред является питательный бульон; в зависимости от состава среды остальные ингредиенты добавляют к питательному бульону.

Существуют два способа приготовления основного питательного бульона: 1)на мясной воде с добавлением готового пептона, который предоставляет собой смесь разнообразных частиц распада белка, не свертывающихся при нагревании (альбумозы, пептоны, пептиды, незначительное количество аминокислот), это так называемый мясо-пептонный бульон; 2)на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина – бульон Хоттингера, пепсина-бульон Мартена) или кислот; среды этой группы богаче аминокислотами. От азотистого состава мясо-пептонных сред и от степени расщепления белка в мясных и прочих гидролизатах зависит содержание в среде общего и аминного азота. Отношение количества аминного азота к количеству общего выражает степень расщепления общего азота. Обычно эта величина выражается в процентах. При изготовлении питательных сред необходимо определять количество общего и аминного азота как основных показателей качества.

Для хорошего роста большинства микробов необходимо содержание в 100 мл бульона не менее 250-300 мг общего азота при наличии в этом количестве аминоазота (аминокислот) в среднем в пределах 25-30%. Принимая во внимание, что для приготовления питательного бульона полуфабрикаты разводят в несколько раз, необходимо доводить гидролиз основного сырья (мяса, козеина и прочих субстратов) до максимального накопления общего азота. Содержание общего и аминного азота в полуфабрикатах представлено в таблице 7.

Биохимическая активность микроорганизмов обусловлена их ферментативной активностью. Ферментативная активность микроорганизмов богата и разнообразна. По ней можно установить не только видовую и типовую принадлежность микроба, но и определить его варианты (так называемые биовары). Ферменты микроорганизмов являются биологическими катализаторами, определяющими метаболические процессы, протекающие в микробных клетках. Разные виды микроорганизмов нередко отличаются по набору ферментов, которые они способны синтезировать.

Далее