Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.13. Гиппуратный тест.

Принцип. Стрептококки группы B (S.agalactiae) и некоторые энтерококки вызывают гидролиз гиппурата натрия (1% водный раствор) с образованием глицина и бензоата натрия. Глицин дезаминируется окисляющим агентом нингидрином, который в процессе химического взаимодействия редуцируется и приобретает пурпурную окраску. Используемая для этого теста среда должна содержать только гиппурат, так как нингидрин реагирует с любой свободной аминокислотой, присутствующей в среде.

Реагенты.

1. 1% водный раствор гиппурата Na.

гиппурат Na 1 г

дистиллированная вода 100 мл

Þ Разливают по 0,4 мл раствора в маленькие пробирки с завинчивающимися крышками.

Þ Хранят замороженными при -20ºC.

Þ Срок хранения не более 6 мес. от момента приготовления.

2. Нингидриновый реагент.

нингидрин 3,5 г

1:1 ацетон-бутанол 100 мл

Þ Смешивают ингредиенты в темной бутыли.

Þ Хранят при комнатной температуре.

Þ Срок хранения не более 6 мес. от момента приготовления.

Ход исследования.

Þ Готовят густую (цвета молока) суспензию стрептококка в 0,5 мл гиппурата Na.

Þ Инкубируют при 35-37ºC 2 часа.

Þ Добавляют в пробирки 0,2 мл нингидрина, смешивают и вновь помещают в термостат на 10 мин., а затем учитывают результат. (На этом этапе важно не передержать пробирки термостате!)

Þ При положительной реакции появляется пурпурное окрашивание через 10 мин после добавления нингидрина (эталонный штамм S.agalactiae АТСС 13813). При отрицательной реакции жидкость остается бесцветной или желтого цвета (эталонный штамм S.pyogenes АТСС 19615).

Ограничения.

Гиппуратный тест позволяет лишь предположительно отнести изучаемые бета-гемолитические, зеленящие и негемолитические (неэнтерококковые) стрептококки к группе В.