3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.1. Каталазный тест².

3.2. Коагулазный тест.

3.3. Новобиоционовый тест.

3.4. Трегалоза-маннитол бульонный тест.

3.5. Окислительно-ферментативный тест с маннитом.

3.6. ДНК-азный тест³.

3.7. Лецитиназный тест.

3.8. Фосфатазный тест.

3.9. Гемолитический тест.

3.10. Бацитрациновый тест.

3.11. Иммунологические тесты.

3.12. CAMP-тест.

3.13. Гиппуратный тест.

3.14. Желчно-эскулиновый тест.

3.15. Желчные тесты.

3.16. Оптохиновый тест.

3.17. PYR(L-Pyrrolidonyl-b-Naphthylamide)-тест.

3.18. Тест толерантности к 6,5% NaCl.

К началу главы | Далее

3.7. Лецитиназный тест.

Принцип. Различные виды бактерий, включая Starhylococcus spp., Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Pseudomas fluorescens и ряд других бактерий, содержат лецитиназу, которую можно выявить на агаровой среде с яичным желтком. При этом непосредственно вокруг колонии появляется непрозрачная (беловатая) зона. Можно выявить и липазную активность по радужному отливу агара около колоний или на поверхности самих колоний.

Среды.

1.Желточный агар:

Протеозный пептон N2 40 г

натрия фосфат двузамещенный () 5 г

калия фосфат однозамещенный () 1 г

NaCl 2 г

магнезии сульфат () 0,1 г

глюкоза 2 г

раствор гемина (5 мг/мл) 1 мл

0,5 г гемина (Sigma, США) растворить в 10 мл 1N гидроксида

натрия. Добавить к 100 мл дистиллированной воды.

Автоклавировать при 121ºC 15 мин.

агар 25 г

дистиллированная вода 1000 мл

Þ После приготовления агаровой кровяной основы из перечисленных ингредиентов доводят pH до 7,6.

Þ Автоклавируют среду при 121ºC 15 мин.

Þ Добавляют 10 мл стерильной желточной эмульсии (Colab Laboratories, Difco Laboratories, США) к 90 мл стерильной расплавленной и остуженной агаровой основе и разливают в чашки Петри (по 20 мл в чашки диаметром 90 мм).

Þ Основа может храниться при 2-8ºC до 2-3 мес после приготовления.

2.Желточно-солевой агар Чистовича может служить альтернативной средой для определения лецитиназной активности у стафилококков и других, продуцирующих лецитиназу, микроорганизмов.

Ход исследования.

Þ Засевают агар бактериальной культурой штрихами или наносят густой инокулят в виде кружочка.

Þ Аэробы инкубируют при 35-37ºC в аэробных условиях (P.fluorescens инкубируют при комнатной температуре), а Clostridium spp. – в анаэробных условиях.

Þ Через 24 и 48 ч, соответственно, изучают посевы на наличие лецитиназы (белая непрозрачная зона вокруг колоний) и/или липазы (по радужному отливу агара около колоний или на поверхности самих колоний).

Контроль качества. Для положительного контроля на лецитиназу используют B. Cereus АТСС 14579, на липазу – Fusobacterium necrophoum АТСС 25286; для отрицательного контроля на лецитиназу и липазу используют E.coli АТСС 25922.