Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.17. PYR(L-Pyrrolidonyl-b-Naphthylamide)-тест.

Принцип. Пирролидонил пептидаза (PYR-аза) присутствует в клетках стрептококков группы A, энтерококков, аэрококков и Gemella spp. и катализирует гидролиз L-пирролидонил-b-нафтиламида (PYR) с высвобождением не свызанной L-пирролидон карбоксиловой кислоты и b-нафтиламида. Реакция выявляется добавлением специфического цветного индикатора, N,N,-диметил-амино-циннамальдегида, вызывающего красное окрашивание. В начале этот тест был разработан как 4-х-часовой пробирочный тест, но сейчас используются коммерческие наборы разных фирм (Carr-Scarborough Microbiological, Inc.; Wellcome Diagnostics; Scott Laboratories, Inc.;Remel Laboratories). Один из них, 10 минутный Identiccult AE тест (Adam Scientific, Inc.) приводится в качестве примера.

Реагенты. Набор Identiccut AE тест (Adam Scientific, Inc.) включает:

Реагент 1: буфер

Реагент 2: индикатор реакции

Тестовые полоски, содержащие PYR

Реагенты и полоски содержаться при 2-8ºC, перед использованием выдерживаются при комнатной температуре.

Ход исследования.

Þ Выбирают колонии, похожие на стрептококки группы A (бета-гемолитические, маленькие, серые) или энтерококки, сходные по их морфологии и в окраске клеток по Граму.

Þ Наносят 3-4 капли реагента 1 (буфер) на предназначенный участок тестовой полоски, а затем туда же переносят 3-5 колоний изучаемых бактерий и аккуратно перемешивают деревянными палочками (входят в набор).

Þ Оставляют тестовую полоску на 10 мин при комнатной температуре, после чего добавляют 2 капли реагента 2 и сразу же учитывают результат.

Интерпретация результатов.

· Появление розовато-красного (вишневого) окрашивания через 10 сек. расценивается как положительный тест на энтерококки (в случае альфа- или гамма-гемолиза) и стрептококки группы A (при наличии бета-гемолиза).

· Задержка окрашивания (позднее 10 сек) или его отсутствие считается отрицательной реакцией.

Контроль качества. Положительный: S.pyogenes АТСС 12344 (стрептококк группы A) и Enterococcus faecalis АТСС 19433. Отрицательный: S.agalactiae АТСС 13813 (бета-гемолитический стрептококк группы B.

Ограничения.

1) Перед тем как выдать результат, необходимо проверить, согласуется ли положительный тест с морфологией колоний и микробных клеток в окраске по Граму.

2) Другие бактерии, не относящиеся к стрептококкам группы A и энтерококкам, могут давать положительную реакцию в PYR-тесте:

· Стрептококки группы A единственные микроорганизмы среди бета-гемолитических стрептококков, способные продуцировать PYR-азу (положительный тест).

· Некоторые не бета-гемолитические бактерии, такие как аэрококки (100%), лактобациллы (7%), гемеллы (73%) и стрептококки, нуждающиеся в дополнительных факторах роста (ауксотрофы), также вызывают положительную реакцию.

· До 4% зеленящих стрептококков продуцируют PYR-азу и их следует различать от энтерококков по более мелким размерам колоний и отсутствует D-группового антигена.

· Lactococcus garvieae, недавно переименованные из стрептококков, продуцируют PYR-азу, положительны в желче-эскулиновом тесте и растут в присутствии 6,5% NaCl, но отличаются от Enterococcus spp. отсутствием D-антигена. Их клиническое значение до конца не изучено.