Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.8. Фосфатазный тест.

Принцип. Фермент фосфатаза отщепляет фосфатную группу от фосфорорганического соединения. Образующийся в результате продукт реакции либо уже является окрашенным, либо приобретает окраску при добавлении соответствующего реактива.

Определение фосфатазы можно проводить двумя методами, дающими совпадающие результаты, с использованием двух разных реактивов (в зависимости от наличия одного из них):

- Динатриевая соль пара-нитрофенилфосфата

- Фенолфталеинфосфат натрия, 25% раствор аммиака.

1-й метод.

Þ 50 мг пара-нитрофенилфосфата (динатриевая соль) растворяют в 3 мл стерильной дистиллированной воды.

Þ Приготовленный раствор добавляют к 100 мл расплавленного и охлажденного 1,8% питательного агара, перемешивают и разливают в чашки Петри. Конечная концентрация реактива в среде составляет 0,05%.

Þ Суточные агаровые культуры исследуемых штаммов засевают петлей на среду (не более 16 штаммов на одну чашку).

Þ Посевы инкубируют при 37ºC 18-24 часа и учитывают результаты.

Интерпретация результатов. Реакция считается положительной, если в толще среды вокруг колоний видна зона интенсивного желтого окрашивания. При отрицательной реакции окрашивание отсутствует.

2-й метод.

Þ Фенолфталеин натрия добавляют к агару в концентрации 0,01%.

Þ Посев и инкубацию осуществляют так же, как и в предыдущем методе.

Þ По окончании инкубации на крышку чашки Петри наливают 5-6 капель 25% раствора аммиака, выдерживают чашку в перевернутом виде 5-10 минут, подвергая выросшую культуру воздействию паров аммиака, затем учитывают результаты.

Интерпретация результатов. Реакция считается положительной, если происходит розовое окрашивание микроколоний. При отрицательной реакции окрашивание отсутствует.