Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.14. Желчно-эскулиновый тест.

Принцип. Стрептококки группы D, энтерококки и незначительное число других бактерий (например, Listeria spp.) могут расти в присутствии 40% желчи и осуществлять гидролиз эскулина до эскулетина, который с цитратом железа образует соединение черного цвета. Большинство штаммов зеленящих стрептококков способны расщеплять эскулин, но не растут в присутствии 40% желчи.

Среды и реагенты. Используют коммерческий агар с желчью и эскулином (Difco), который можно приготовить самостоятельно.

Желче-эскулиновый агар:

мясной экстракт 3 г

пептон 5 г

бычья желчь, сухая 40 г

эскулин 1 г

цитрат железа 0,5 г

агар 1 мл

дистиллированная вода 1000 мл

pH 7,2

Ход исследования.

Þ Среду стерилизуют автоклавированием при 121ºC 15 мин, разливают в чашки Петри.

Þ Несколько колоний стрептококка засевают легкими зигзагообразными штрихами на поверхность агара (можно разделить чашку и засевать несколько разных стрептококков).

Þ Инкубируют чашки в течение ночи при 35ºC в аэробных условиях.

Þ Изучают наличие роста и почернение среды (гидролиз эскулина).

Þ При отсутствии роста посевы реинкубируют еще сутки.

Интерпретация результатов. Наличие роста с почернением среды (гидролиз эскулина) расценивается как положительный тест; если рост отсутствует или есть рост без почернения среды – тест отрицательный.

Контроль качества. Enterococcus faecalis АТСС 929212 – по эскулину и желчи положительный. Streptococcus salivarius АТСС 13419 – способен гидролизовать один эскулин, но в присутствии желчи гидролиз эскулина не происходит.

Ограничения и предосторожности.

Если посевная доза культуры излишне густая или концентрация желчи в среде менее 40%, положительный результат может дать и зеленящий стрептококк.