2. Методы идентификации грам (-) бактерий.

2.1. Оксидазный тест.

2.2. Индольный тест.

2.3.Ферментация углеводов (“пестрый ряд”).

2.4.ONPG-тест.

2.5.Утилизация цитрата.

2.6.Утилизация малоната.

2.7.Тест с трибутирином (для идентификации M.catarrhalis).

2.8.Тесты декарбоксилирования и гидролиза аминокислот.

2.9.Фенилаланиновый тест.

2.10.Сероводородный тест (H₂S-тест).

2.11.Гидролиз эскулина.

2.12.Уреазный тест.

2.13.Разжижение желатина.

2.14.Тест с метиловым красным.

2.15.Тест Фогес-Проскауэра.

2.16.Редукция нитратов.

2.17.Окислительно-ферментативный (ОФ) тест.

К началу главы | Далее

2.12. Уреазный тест.

Принцип. Некоторые бактерии продуцируют уреазу, которая расщепляет мочевину до аммиака и ; в результате происходит сдвиг pH в щелочную сторону и среда в присутствии индикатора окрашивается в красный цвет.

Среды и реагенты. Обычно используют коммерческий агар с мочевиной Христенсена или уреазный бульон Рустигана-Стюарта, либо готовят их в лаборатории.

Агар с мочевиной Христенсена:

1. Концентрат мочевины

пептон 1 г

NaCl 5 г

глюкоза 1 г

калия фосфат однозамещенный ( ) 2 г

феноловый красный (индикатор) 0,012 г

мочевина 20 г

дистиллированная вода 100 г

Þ Растворяют ингредиенты в воде. Вместо 0,012 г фенолового красного используют 6 мл 1:500 раствора (готовят добавлением 0,2 г фенолового красного к 100 мл дистиллированной воды).

Þ Доводят pH до 6,8-6,9.

Þ Стерилизуют путем фильтрации.

2. Жидкий агар:

агар 15 г

дистиллированная вода 900 мл

Þ Растворяют агар в воде, автоклавируют при 121º 15 мин.

Þ Остужают до 50-55ºС.

Þ Добавляют к жидкому агару концентрат мочевины, перемешивают и разливают в стерильные пробирки.

Þ Пробирки устанавливают в наклонном положении так, чтобы при застывании агара образовался глубокий столбик.

Уреазный бульон:

мочевина 20 г

калия фосфат однозамещенный ( ) 9,1 г

натрия фосфат двузамещенный ( ) 9,5 г

дрожжевой экстракт 0,1 г

феноловый красный (индикатор) 0,01 г

дистиллированная вода 100 мл

Þ Растворяют ингредиенты в воде и фильтруют через фильтры Зейтца.

Þ Разливают бульон по 1-2 мл в маленькие пробирки.

Þ Хранят в холодильнике.

Контроль качества осуществляют с эталонными культурами P.mirabilis АТСС 29245 (положительный контроль) и E.coli АТСС 25922 (отрицательный контроль).

Ход исследования.

При использовании агаровой среды:

Þ Стерильной петлей или деревянной палочкой берут несколько изолированных колоний одного типа и производят густой посев по поверхности скошенной части агара.

Þ Инкубируют при 37ºC и учитывают результаты через 2,4 часа и после ночной инкубации.

Þ При отрицательном результате (индикатор остается бесцветным) посевы наблюдают до 4-х дней. При положительном результате среда окрашивается в красный цвет.

При использовании бульона:

Þ Производят густой посев культуры и инкубируют при 37ºC.

Þ Результаты учитывают через 2,4 и 24 часа.

Þ При положительном результате среда окрашивается в красный цвет; при отрицательном результате цвет среды не изменяется.