2. Методы идентификации грам (-) бактерий.

2.1. Оксидазный тест.

2.2. Индольный тест.

2.3.Ферментация углеводов (“пестрый ряд”).

2.4.ONPG-тест.

2.5.Утилизация цитрата.

2.6.Утилизация малоната.

2.7.Тест с трибутирином (для идентификации M.catarrhalis).

2.8.Тесты декарбоксилирования и гидролиза аминокислот.

2.9.Фенилаланиновый тест.

2.10.Сероводородный тест (H2S-тест).

2.11.Гидролиз эскулина.

2.12.Уреазный тест.

2.13.Разжижение желатина.

2.14.Тест с метиловым красным.

2.15.Тест Фогес-Проскауэра.

2.16.Редукция нитратов.

2.17.Окислительно-ферментативный (ОФ) тест.

 

 

К началу главы |    Далее

2.16. Редукция нитратов.

 

Принцип. Некоторые микроорганизмы способны редуцировать нитриты в нитраты, продуцируя фермент нитратредуктазу, вплоть до образования азота в качестве конечного продукта реакции. В присутствии нитрита добавляемые в среду реагенты окрашивают ее в розовый цвет. При отрицательной реакции на нитриты добавление в среду цинка позволяет выяснить, связано ли это с неспособностью микроорганизма редуцировать нитраты, либо, наоборот, произошла полная их редукция с образованием газа.

 

Среды и реагенты. Обычно используют коммерческие среды или приготовленные самостоятельно.

1. Нитратный бульон:

Бакто-пептон                                                             20 г

калия нитрат                                                              2 г

дистиллированная вода                                             100 мл

Þ          Доводят pH до 7,0 и разливают по 4 мл в пробирки с “поплавками” (перевернутые вверх дном пробирки Durham).

Þ          Автоклавируют при 121º 15 мин.

2. РеагентN1:

сульфаниловая кислота                                             2,8 г

дистиллированная вода                                             250 мл

ледяная уксусная кислота                                         100 мл

1.     Реагент N2:

диметил-а-нафтиламин                                           2,1 г

дистиллированная вода                                            250 мл

ледяная уксусная кислота                                        100 мл

 

Контроль качества осуществляют с эталонными культурами P.aeruginosa АТСС 27853 (редукция нитрата до азота), E.coli АТСС 25922 (редукция нитрата в нитрит), Acinetobacter lwoffii АТСС 15309 (отсутствие редукции нитратов).

 

Ход исследования.

Þ          Производят не густой посев (1-2 колоний) в нитратный бульон.

Þ          Инкубируют при 35ºC до 48 часов.

Þ          Через 24 ч стерильной пипеткой забирают 1 мл бульона в маленькую стерильную пробирку (12х75 мм).

Þ          Добавляют 1-2 капли реагента N1 и реагента N2 и наблюдают результат. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии нитрита.

Þ          Если красное окрашивание не появляется, добавляют щепотку  цинкового порошка

Þ          Если результат остается отрицательным, продолжают инкубацию первичного посева (без реагентов) и повторяют тест через 24 часа.

 

Интерпретация результатов.

1)            Появление красного цвета после добавления реагентов N1 и N2 означает редукцию нитратов в нитриты (положительный нитратный тест).

2)            Появление красного цвета после добавления цинка свидетельствует об отсутствии редукции нитратов (отрицательный тест).

3)            Отсутствие окраски после добавления цинка свидетельствует о редукции нитратов до образования азота. При этом должны быть видны пузырьки газа в “поплавке” (положительный нитратный тест).

4)            Красный цвет после добавления реагентов N1 и N2 с образованием газа в “поплавке” свидетельствует о редукции нитратов до нитритов и азота.